Меню Рубрики

Иммунофенотипирование лимфоцитов венозной крови

При исследовании определяется принадлежность клеток крови к тому или иному виду. Для проведения анализа требуется использование специального оборудования — цитофлюориметра. Также могут применяться микроскопы, при помощи которых фиксируют люминесцирующие метки и проводят их точный подсчёт. Оборудование должно давать возможность опознать каждую специальную метку в исследуемом материале.

Забор крови производят в вакуумную пробирку.

Кровь в пробирке обязательно перемешивают, медленно переворачивая ёмкость 10 раз. Транспортируют в лабораторию материал при температуре от 18 до 23 градусов, вертикально установив пробирку. Максимальный срок хранения взятого материала сутки. Само исследование занимает менее 5 часов.

При исследовании интерес представляют несколько видов клеток. В бланке исследования будут зафиксированы полученные данные.

  1. Здоровые полноценные лимфоциты. Фиксируется абсолютное количество лимфоцитов, которые не деформированы, имеют правильное круглое ядро. Патологические изменения в них отсутствуют.
  2. Лимфоциты Т-клеточные. Ядро клеток формируется в вилочковой железе и тимусе. Клетки контролируют работу В-лимфоцитов, образующих ряд антител.
  3. Количество Т-хелперов. Одна из разновидностей T-лимфоцитов. Они обеспечивают правильный иммунный ответ организма при обнаружении чужеродного антигена. Данные клетки первого типа предупреждают развитие раковых клеток, а второго — действуют на агрессивные аллергены.
  4. Лимфоциты Т-цитотоксические. Они отвечают за уничтожение собственных клеток организма, если они поражены. Это свойство помогает противостоять опухолевым процессам, тяжёлыми бактериальными заболеваниями, когда возбудитель паразитирует внутри клетки.
  5. В-лимфоциты. Отвечают за выработку веществ, которые отвечают за правильность работы гуморального иммунитета.
  6. ЕК-клетки. Это естественные киллеры, действие которых избирательное и направленное на клетки с неопластическими изменениями.
  7. ЕКТ. Также природные киллеры, которые уничтожают патологические клетки, замаскированные под Т-лимфоциты.
  8. Иммунорегуляторный индекс. Он отражает соотношение Т-цитотоксических клеток и Т-хелперов.

Исследование проводится по ряду показаний. В общую программу диспансеризации данный анализ не входит. Показания для проведения исследования следующие:

  • инфекционные патологии, если они затяжные или хронические;
  • сильные аллергии;
  • наличие симптомов иммунодефицита различной природы;
  • подозрения на рост опухолевых новообразований раковой или доброкачественной природы;
  • заболевания аутоиммунного характера;
  • тяжёлые плановые операции;
  • подготовка к пересадке внутренних органов;
  • длительный приём лекарственных препаратов, которые могут повлиять на лимфоциты.

Отклонения показателя от нормы в большую сторону указывает на развитие воспаления иммунной природы. Чаще всего явление связано с лимфолейкозом, некоторыми вирусными и бактериальными заболеваниями, а также переходом патологии в хроническую форму. Отклонение в меньшую сторону указывает на иммунологический паралич. Такое явление обычно сопровождает период активного развития раковых опухолей. Также возможно присутствие поражений сердца.

Повышенный показатель указывает на наличие воспалений в острой или хронической формах. Заболевание может быть вызвано аллергическими, инфекционными или аутоиммунными процессами. При падении уровня компонента крови речь может идти о вирусной инфекции, раковом новообразовании или очаговом воспалении бактериальной природы.

Изменение показателя выше нормы указывает на тяжёлую, запущенную онкологию, сильные хронические воспаления или чрезмерное синтезирование антигенов против вирусов и бактерий. Понижение показателя возникает из-за высокого уровня Т-лимфоцитов и связано с состояниями, вызывающими его.

Повышение показателя указывает на развитие опухолевого процесса. Также возможно тяжёлое вирусное заболевание в активной форме. Понижение показателя связано с состояниями, развивающимися по причине аутоиммунных нарушений.

Высокие показатели указывают на воспаление в острой форме. Особенно высокие показатели отмечаются при аутоиммунных воспалениях. Снижение показателя связано с вторичным иммунодефицитом и иммунологическим параличом.

Увеличение показателя возможно по причине хронического воспаления, активной инфекции, присутствующей в организме длительное время, и воспалительных осложнений. Падение значения не имеет диагностической ценности.

источник

Диагноз хронического лимфолейкоза (ХЛЛ) может быть установлен при абсолютном количестве лимфоцитов в крови более 5•10 9 /л, наличии в костно-мозговом пунктате не менее 30 % лимфоцитов и иммунологическом подтверждении клонового В-клеточного характера лимфоцитоза.

В подавляющем большинстве случаев предположение о наличии у больного хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ) возникает в связи с изменениями картины крови: обнаружение абсолютного и относительного лимфоцитоза. Международное рабочее совещание в 1989 г. установило среди критериев для постановки диагноза хронического лимфолейкоза наличие абсолютного лимфоцитоза в крови не менее 10 • 109/л, однако позже это положение было пересмотрено. В настоящее время для предположения о заболевании ХЛЛ считается достаточным наличие абсолютного лимфоцитоза 5•10 9 /л.

Иногда на протяжении 2—3 лет при числе лейкоцитов, лишь незначительно превышающем норму или даже соответствующем нормальному показателю, наблюдается постепенно нарастающий лимфоцитоз — 50—60—70 %. Эти изменения лейкоцитарной формулы еще не являются оснаванием для постановки диагноза хронического лимфолейкоза без дополнительных исследований: пункции костного мозга и иммунологического исследования крови и костно-мозгового пунктата. Тем не менее такой пациент должен быть под пристальным наблюдением врача: обязательны осмотр и анализы крови каждые 3—4 мес, поскольку, как правило, такие изменения крови являются проявлением начала хронического лимфолейкоза.

В крови среди ядерных элементов обнаруживается преобладание зрелых лимфоцитов — клеток малого размера, округлых, с плотным ядром и узким ободком светлой или слегка базофильной цитоплазмы. В мазках крови обычно определяется то или иное количество клеток Гумпрехта—Боткина — полуразрушенных размытых ядер лимфоцитов. Их появление связано с повышенной ломкостью мембраны лимфоцитов при хроническом лимфолейкозе.

Количество клеток Гумпрехта — Боткина, как правило, больше у больных с высоким лейкоцитозом. Клетки, или, как их нередко называют, тени Гумпрехта — Боткина, образуются при приготовлении мазка, их наличие и количество не имеют прогностического значения.

Количество лейкоцитов при хроническом лимфолейкозе может быть различным, в большинстве случаев при установлении диагноза хронического лимфолейкоза оно составляет 20—50•10 9 /л, но нередко при первом обращении к врачу уже имеется гиперлейкоцитоз (100—500 • 10 9 /л), свидетельствующий о длительном недиагностированном периоде заболевания. Мы наблюдали больного, у которого при первом обращении к врачу по поводу длительно существующих увеличенных лимфатических узлов количество лейкоцитов оказалось 1200•10 9 /л.

При подсчете лейкоцитарной формулы содержание лимфоцитов обычно составляет 50—70 %, при высоком лейкоцитозе иногда достигает 95—99 %. Наряду со зрелыми лимфоцитами в крови обычно в очень небольшом количестве (как правило, не более 1—3 %) удается обнаружить пролимфоциты — более крупные клетки с отчетливой нуклеолой в ядре. Постепенное увеличение содержания пролимфоцитов в течение болезни, так же как их постоянное присутствие в количестве 10 % и более, является плохим прогностическим признаком.

Е. Matutes и соавт. на большом клиническом материале показали, что выживаемость больных хроническим лимфолейкозом прямо коррелирует с числом циркулирующих пролимфоцитов и значительно снижается уже при числе пролимфоцитов более 5 %.

На основании изучения морфологической картины крови почти 550 больных ХЛЛ Е. Matutes и соавт. выделили примерно 15 % больных с необычной морфологией клеток. Они предложили считать таких больных страдающими атипичным ХЛЛ, отметив два его подтипа: один с повышенным более 10 % количеством пролимфоцитов и второй — с лимфоплазмоцитоидной дифференцировкой лимфоцитов и/или наличием лимфоцитов с расщепленным (cleaved) ядром. Во втором случае одновременно имеются обычные лимфоциты, характерные для хронического лимфолейкоза, и переходные формы — более крупные лимфоциты с выраженной базофилией цитоплазмы или с намечающейся расщелиной ядра.

Течение болезни в этом случае обычно не отличается от характерного для типичного хронического лимфолейкоза, однако нередко при обоих указанных вариантах имеется трисомия хромосомы 12. При обоих подтипах: повышенном количестве пролимфоцитов и лимфоплазмоцитоидной морфологии лимфоцитов — течение болезни у больных с трисомией хромосомы 12 более агрессивное.

Костно-мозговой пунктат при хроническом лимфолейкозе обычно гиперклеточный, инфильтрация лимфоцитами чаще всего имеет диффузный характер, хотя иногда встречаются случаи нодулярной инфильтрации. В большинстве случаев процентное содержание лимфоцитов значительно превышает необходимые для установления диагноза 30 %, нередко достигая 90—95 %.

Лимфоциты в костном мозге морфологически не отличаются от лимфоцитов крови, но обычно имеется 3—5 % пролимфоцитов даже в тех случаях, когда они не обнаруживаются в крови.

При морфологическом исследовании лимфатического узла обнаруживают стирание нормального рисунка и мономорфную инфильтрацию лимфоцитами, морфологически сходными с лимфоцитами крови и костного мозга, иногда имеющими несколько большие размеры. В небольшом количестве встречаются пролимфоциты и клетки, названные параиммунобластами: клетки среднего размера с дисперсным хроматином и круглыми или овальными ядрышками. В селезенке преобладает инфильтрация белой пульпы, хотя красная пульпа обычно тоже оказывается в той или иной степени инфильтрированной малыми лимфоцитами.

Несмотря на характерную картину, результаты морфологического исследования не могут считаться достаточными для установления диагноза хронического лимфолейкоза (ХЛЛ), поскольку аналогичная морфологическая картина крови и костного мозга нередко наблюдается при фолликулярной и мантийно-клеточной лимфомах с поражением костного мозга. Согласно современным критериям, диагноз хронического лимфолейкоза может считаться установленным только после иммунологического исследования, подтверждающего диагноз. Патологические лимфоциты при хроническом лимфолейкозе имеют абсолютно характерный иммунофенотип.

Они экспрессируют антигены CD19, CD5, CD23, отмечается слабая экспрессия на поверхности клеток иммуноглобулинов (экспрессируются IgM, нередко одновременно с IgD) с одной L-цепью, определяется слабая экспрессия антигенов CD20 и CD22, у ряда больных экспрессируется молекула FMC-7. Антиген CD79b, или Igb, являющийся частью В-клеточного рецептора, либо не экспрессируется, либо экспрессируется очень слабо в подавляющем большинстве случаев.

Характерный иммунофенотип опухолевых клеток позволяет отличить В-ХЛЛ от других лимфопролиферативных заболеваний.

Е. Matutes и соавт. предложили числовую систему, помогающую при дифференциальной диагностике В-ХЛЛ и других лимфопролиферативных заболеваний. По этой системе каждый иммунологический признак, характерный для В-ХЛЛ, расценивается как 1 балл, его противоположное значение — как 0.

Система выглядит следующим образом: поверхностные иммуноглобулины слабая экспрессия — 1, сильная — 0; CD5+ -1, CD5-0; CD23+ -1, CD23-0; CD22 — слабая экспрессия — 1, сильная — 0; CD79b — отсутствует — 1, экспрессируется — 0; FMC-7— отсутствует — 1, экспрессируется — 0. Оценив по этой системе сумму полученных баллов у 298 больных хроническим лимфолейкозом и 166 больных другими зрелоклеточными лимфопролиферативными заболеваниями, авторы показали, что у 96,8 % больных хроническим лимфолейкозом сумма полученных баллов составляет 3—5, в то время как более чем у 94 % больных другими лимфопролиферативными заболеваниями она равна 1—2 баллам.

Иногда возникают трудности в дифференциальной диагностике хронического лимфолейкоза и так называемого монокло-нового В-лимфоцитоза неопределенного значения (MLUS — monoclonal lymphocytosis of undetermined significance), названного так по аналогии с моноклоновыми гаммапатиями неопределенного значения (MGUS). Термин был впервые введен еще в конце 80-х годов прошлого века для отличия непрогрессирующего моноклонового лимфоцитоза без признаков ХЛЛ от индолентного ХЛЛ с признаками заболевания. В настоящее время чаще употребляется термин CLUS (clonal lymphocytosis of undetermined significance).

При CLUS обычно на протяжении многих лет сохраняются умеренный и стабильный лейкоцитоз и лимфоцитоз (меньше необходимых для диагноза ХЛЛ 5•10 9 /л), нормальные показатели эритро- и тромбоцитопоэза, отсутствует увеличение лимфатических узлов и селезенки.

В наблюдениях С. Wang и соавт. клиническая картина и лабораторные показатели при CLUS оставались неизменными на протяжении 3—10 лет. Клоновая природа лимфоцитоза была подтверждена рестрикцией L-цепи экспрессируемых на поверхности лимфоцитов иммуноглобулинов. Никаких хромосомных аберраций на протяжении всего времени наблюдения выявлено не было. У всех пациентов исследование иммунофенотипа на протяжении всего времени наблюдения обнаруживало экспрессию лимфоцитами антигенов CD19, CD20 и слабую экспрессию поверхностных иммуноглобулинов, однако неизменно выявляло отсутствие экспрессии CD5 и CD23. Таким образом, данные наблюдения не отвечают всем признакам В-ХЛЛ. Однако в большинстве случаев иммунофенотип при CLUS не отличается от типичного иммунофенотипа В-ХЛЛ. A. Rowstron на основании анализа нескольких сотен наблюдений раннего стабильного хронического лимфолейкоза и сравнения их с CLUS указывает, что частота прогрессирования в этих случаях одинакова и не превышает 10 %.

Известно, что истинный хронический лимфолейкоз, имеющий все необходимые для установления диагноза черты, также может годами не проявлять признаков прогрессирования. В подобных случаях имеется характерный для данного заболевания иммунофенотип, а при длительном наблюдении (в одном нашем наблюдении спустя 22 года со времени постановки диагноза) во многих случаях появляются черты прогрессирующего хронического лимфолейкоза. В других наблюдениях клиническая картина сохраняется неизменной на протяжении всей жизни больного.

Мы наблюдали больную в течение 29 лет, которая не получала никакого лечения, поскольку все это время у нее была стабильная гематологическая и клиническая картина: отсутствие увеличенных лимфатических узлов и селезенки, количество лейкоцитов 15—20•10 9 /л, лимфоцитов 65—70 %. Это наблюдение похоже на наблюдения Т. Han и соавт., описавших 10 больных с лейкоцитозом более 10 • 109/л и моноклоновым В-клеточным лимфоцитозом, у которых в течение 6—24 лет не было признаков прогрессирования и которые не нуждались в терапии.

Читайте также:  Аббревиатура лимфоцитов в крови

Возможно, эти наблюдения являются отражением возрастного изменения В-клеточного репертуара. Почти 10 лет назад было обнаружено, что у мышей с возрастом постепенно суживается разнообразие клонов В-клеток (В-клеточный репертуар) и одновременно происходит увеличение размеров (амплификация) отдельных клонов. N. Chiorazzi и М. Ferrarini указывают, что у здоровых людей старше 50 лет наличие таких клонов В-лимфоцитов является обычным. Возможно, отдельные клоны, возникшие под влиянием длительной стимуляции определенным антигеном, могут приобретать значительные размеры и определяться при рутинном иммунологическом исследовании.

Обнаруженная недавно в половине исследованных методом FISH случаев CLUS делеция 13ql4, являющаяся самой частой генетической аберрацией при ХЛЛ, подтверждает мнение о том, что CLUS следует расценивать как раннюю стадию хронического лимфолейкоза доброкачественного течения. В то же время P. Ghia и соавт., обследовав 500 здоровых людей старше 65 лет, обнаружили у части из них клоны клеток с иммунофенотипом, характерным для различных лимфопролиферативных заболеваний, иногда у одного и того же больного. Авторы полагают, что это, скорее всего, является не ранней стадией болезни, а отражением постепенно суживающегося с возрастом В-клеточного репертуара.

В 1982 г. описан постоянный поликлоновый В-лимфоцитоз у курящих женщин средних лет. У некоторых из них были частые респираторные заболевания. Это редкий феномен, и со времени первой публикации появилось не более 90 подобных описаний. Исследования с помощью ПЦР показали, что во всех изученных случаях имеется реаранжировка BCL-2/IgH, которая, однако, не всегда сопровождалась повышенной экспрессией BCL-2.

У некоторых курящих женщин с поликлоновым В-лимфоцитозом обнаружены незначительное увеличение размеров селезенки и поликлоновая гамма-патия, которые, как и лимфоцитоз, иногда исчезали после прекращения курения.

Несколько случаев поликлонового В-лимфоцитоза описаны у некурящих. С помощью ПЦР у некоторых пациентов в крови был обнаружен вирус Эпштейна—Барр. Неясно, играет ли этот вирус роль в развитии синдрома поликлонового В-лимфоцитоза.

Очевидно, в настоящее время подобные случаи не являются трудными для дифференциальной диагностики с хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ), поскольку поликлоновый характер лимфоцитоза обнаруживается при иммунофенотипировании. Трудности для трактовки представляет описанный недавно случай поликлонового В-клеточного лимфоцитоза с комплексными хромосомными аберрациями — трисомией хромосом 3, 15 и 18, инверсией хромосомы 18, t(13;14) в отдельных клетках у длительно курящей женщины. Гематологическая картина остается стабильной на протяжении нескольких лет наблюдения, но отмечаются часто повторяющиеся инфекции верхних дыхательных путей. Необходимо длительное наблюдение для выяснения вопроса о том, не являются ли имеющиеся хромосомные аберрации отражением начала лимфопролиферативного заболевания.

При некоторых хронических инфекциях (туберкулез, сифилис), иногда при неинфекционных заболеваниях (тиреотоксикоз, болезнь Аддисона) наблюдается постоянный Т-клеточный лимфоцитоз, чаще всего при нормальном количестве лейкоцитов. Его также нетрудно дифференцировать от хронического лимфолейкоза (ХЛЛ) на основании данных иммунологического исследования.

источник

Исследование включает в себя определение абсолютных и относительных значений субпопуляционного состава лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD19, CD56). Рекомендуется к назначению для контроля показателей клеточного звена иммунной системы в динамике после комплексного иммунологического обследования.

Иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии, субпопуляции лимфоцитов.

Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
  • Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
  • Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
  • Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
  • Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
  • Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Оценка клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови человека — основной компонент в оценке иммунного статуса — выполняется методом проточной цитофлуориметрии.

Иммунофенотипирование — характеристика клеток при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. CD антигены (англ. cluster of differentiation antigens) — это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлуориметрии лежит проведение фотометрических и флюоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

Метод позволяет не только определить количественное соотношение основных популяций лимфоцитов:

  • Т-лимфоциты (CD3 + CD19 — );
  • Т-хелперы/индукторы (CD3 + CD4 + CD45 + );
  • Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3 + CD8 + CD45 + );
  • истинные «натуральные киллеры» (NK-клетки) (CD3 — CD56 + CD45 + );
  • В-лимфоциты (CD19 + CD3 — );

— но и оценить малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:

  • Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток(Т-NK-клетки) (CD3 + CD56 + CD45 + );
  • NK-клетки, экспрессирующие α-цепь антигена CD8 (CD3 — СD8 + CD45 + ).

Когда назначается исследование?

Рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска по четырем основным иммунопатологическим синдромам.

  • частые ОРВИ, хронические инфекции ЛОР-органов (гнойные синуситы, отиты, периодически встречающиеся лимфадениты, пневмонии с тенденцией к рецидивированию, бронхоплевропневмонии);
  • бактериальные инфекции кожи и подкожной клетчатки (пиодермии, фурункулез, абсцессы, флегмоны, септические гранулемы, рецидивирующий парапроктит у взрослых);
  • урогенитальные инфекции;
  • грибковые поражения кожи и слизистых оболочек, кандидоз, паразитарные инвазии;
  • рецидивирующий герпес различной локализации;
  • гастроэнтеропатия с хронической диареей неясной этиологии, дисбактериозом;
  • длительный субфебрилитет, лихорадка неясной этиологии;
  • генерализованные инфекции: сепсис, гнойные менингиты.

С аллергическим (атопическим) синдромом:

  • атопический дерматит;
  • нейродермит;
  • экзема с инфекционным компонентом;
  • тяжелая атопическая бронхиальная астма, поллиноз, хронический астматический бронхит.
  • ревматоидный артрит;
  • рассеянный склероз;
  • диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит);
  • аутоиммунный тиреоидит;
  • неспецифический язвенный колит.

С иммунопролиферативным синдромом:

  • опухолевые процессы в иммунной системе (лимфомы, болезнь Ходжкина, острый и хронический лимфолейкоз, саркома Капоши).

Изменения различных клеточных популяций лимфоцитов в сторону повышения или понижения развиваются при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.

Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.

Субпопуляция лимфоцитов

Повышение показателя

Снижение показателя

  • Острые и хронические инфекции;
  • гормональный дисбаланс;
  • длительный прием лекарственных препаратов (особенно монотерапия);
  • прием биологически активных добавок;
  • интенсивные занятия спортом;
  • беременность;
  • Т-клеточные лейкозы.
  • Некоторые виды инфекций;
  • иммунодефицитные состояния;
  • алкогольный цирроз печени;
  • карцинома печени;
  • аутоиммунные заболевания;
  • прием иммуносупрессивных препаратов.
  • Ряд аутоиммунных заболеваний;
  • гормональный дисбаланс;
  • некоторые инфекции;
  • отдельные Т-клеточные лейкозы;
  • отравление солями бериллия.
  • Иммунодефицитные состояния (основной лабораторный признак вторичного иммунодефицита);
  • алкогольная болезнь печени;
  • аутоиммунные заболевания;
  • прием иммуносупрессивных препаратов или стероидов.

Т-цитотоксические лимфоциты (CD3 + CD8 + CD45 + )

  • Некоторые вирусные инфекции;
  • ряд Т-клеточных лейкозов;
  • наркоз;
  • острая фаза аллергии;
  • ряд аутоиммунных патологий.
  • Некоторые виды аутоиммунных, аллергических заболеваний;
  • иммуносупрессивная терапия.
  • Ряд аутоиммунных патологий;
  • стресс;
  • В-клеточные лимфомы;
  • длительная экспозиция формальдегидом.
  • Гипореактивность, перераспределение в очаги воспаления;
  • общий вариабельный иммунодефицит;
  • наследственный иммунодефицит;
  • внутривенное введение иммуноглобулинов;
  • алкогольный цирроз печени.

(CD3 — CD56 + CD45 + ), (CD3 — CD16 + CD45 + )

  • Фаза восстановления после вирусных инфекций (гепатит В, С);
  • ряд аутоиммунных заболеваний;
  • онкологические заболевания;
  • беременность;
  • алкогольный цирроз печени.
  • Ряд инфекций;
  • ряд аутоиммунных заболеваний;
  • интенсивное курение;
  • иммуносупрессивная терапия и терапия стероидами.
  • Длительные хронические воспалитель­ные процессы;
  • тяжелое течение воспалительных процессов;
  • длительная персистенция антигена в организме.

Не имеет диагнос­тического значения.

В совокупности с клиническими данными, симптоматикой, другими методами лабораторных исследований вышеуказанные изменения являются диагностическим признаком возникновения этих патологических процессов в организме человека.

  • Результаты данного исследования необходимо сопоставлять с клиническими данными и показателями других лабораторных анализов.
  • Следует отметить, что оценка показателей в динамике существенно повышает клиническую значимость исследования.

источник

Вряд ли найдется кто-то, кто еще ни разу не сдавал кровь из пальца на анализы. Общий анализ крови берут практически при любом заболевании. Так в чем же его диагностическая ценность и какие диагнозы он может подсказать? Разбираем по-порядку.

Основные показатели, на которые врач обращает внимание при расшифровке общего анализа крови — это гемоглобин и эритроциты, СОЭ, лейкоциты и лейкоцитарная формула. Остальные скорее являются вспомогательными.

Чаще всего общий анализ крови назначают, чтобы понять, есть ли в организме воспаление и признаки инфекции, и если да, то какого происхождения — вирусного, бактериального или другого.

Также общий анализ крови может помочь установить анемию — малокровие. И если в крови есть ее признаки — назначают дополнительные анализы, чтобы установить причины.

Еще общий анализ крови назначают, если есть подозрение на онкологический процесс, когда есть ряд настораживающих симптомов и нужны зацепки. В этом случае кровь может косвенно подсказать, в каком направлении двигаться дальше.

Другие показания обычно еще реже.

Сейчас на бланках с результатом анализов в основном используют англ. аббревиатуры. Давайте пройдемся по основным показателям и разберем, что они значат.

Это более детальная информация о тех самых WBC из предыдущего блока.

Лейкоциты в крови очень разные. Все они в целом отвечают за иммунитет, но каждый отдельный вид за разные направления в иммунной системе: за борьбу с бактериями, вирусами, паразитами, неспецифическими чужеродными частицами. Поэтому врач всегда смотрит сначала на общий показатель лейкоцитов из перечня выше, а затем на лейкоцитарную формулу, чтобы понять, а какое звено иммунитета нарушено.

Обратите внимание, что эти показатели обычно идут в двух измерениях: абсолютных (абс.) и относительных (%).

Абсолютные показывают, сколько штук клеток попало в поле зрение, а относительные — сколько эти клетки составляют от общего числа лейкоцитов. Это может оказаться важной деталью — например, в абсолютных цифрах лимфоциты вроде как в приделах нормы, но на фоне общего снижения всех лейкоцитов — их относительное количество сильно выше нормы. Итак, лейкоцитарная формула.

А теперь пройдемся по каждому из этих показателей и разберем, что они значат.

Гемоглобин — это белок, который переносит по организму кислород и доставляет его в нужные ткани. Если его не хватает — клетки начинают голодать и развивается целая цепочка симптомов: слабость, утомляемость, головокружение, выпадение волос и ломкость ногтей, заеды в уголках губ и другие. Это симптомы анемии.

В молекулу гемоглобина входит железо, а еще в его формировании большую роль играют витамин В12 и фолиевая кислота. Если их не хватает — в организме нарушается синтез гемоглобина и развивается анемия.

Есть еще наследственные формы анемии, но они случаются гораздо реже и заслуживают отдельного разбора.

В норме гемоглобин составляет 120−160 г/л для женщин и 130-170 г/л для мужчин. Нужно понимать, что в каждом конкретном случае нормы зависят от лаборатирии. Поэтому смотреть нужно на референсные значения той лаборатории, в которой вы сдавали анализ.

Повышенные цифры гемоглобина чаще всего случаются из-за сгущения крови, если человек излишне потеет во время жары, или принимает мочегонные. Еще повышенным гемоглобин может быть у скалолазов и людей, которые часто бывают в горах — это компенсаторная реакция на недостаток кислорода. Еще гемоглобин может повышаться из-за заболеваний дыхательной системы — когда легкие плохо работают и организму все время не хватает кислорода. В каждом конкретном случае нужно разбираться отдельно.

Снижение гемоглобина — признак анемии. Следующим шагом нужно разбираться какой.

Эритроциты — это красные клетки крови, которые транспортируют гемоглобин и отвечают за обменные процессы тканей и органов. Именно гемоглобин, а точнее — его железо, красит эти клетки в красный.

Нормы для мужчин — 4,2-5,6*10*9/литр. Для женщин — 4-5*10*9/литр. Которые опять-таки зависят от лаборатории.

Повышаться эритроциты могут из-за потери жидкости с потом, рвотой, поносом, когда сгущается кровь. Еще есть заболевание под названием эритремия — редкое заболевание костного мозга, когда вырабатывается слишком много эритроцитов.

Читайте также:  200 лимфоциты в крови

Снижении показателей обычно является признаком анемии, чаще железодефицитной, реже — другой.

Норма — 80-95 для мужчин и 80-100 для женщин.

Объем эритроцитов уменьшается при железодефицитной анемии. А повышается — при В12 дефицитной, при гепатитах, снижении функции щитовидной железы.

Повышается этот показатель редко, а вот снижение — признак анемии или снижения функции щитовидной железы.

Повышение значений почти всегда свидетельствует об аппаратной ошибке, а снижение – о железодефицитной анемии.

Это процентное соотношение форменных элементов крови к ее общему объему. Показатель помогает врачу дифференцировать, с чем связана анемия: потерей эритроцитов, что говорит о заболевании, или с избыточным разжижением крови.

Это элементы крови, ответственные за формирование тромботического сгустка при кровотечениях. Превышение нормальных значений может свидетельствовать о физическом перенапряжении, анемии, воспалительных процессах, а может говорить о более серьезных проблемах в организме, среди которых онкологические заболевания и болезни крови.

Снижение уровня тромбоцитов в последние годы часто свидетельствует о постоянном приеме антиагрегантов (например, ацетилсалициловой кислоты) с целью профилактики инфаркта миокарда и ишемического инсульта головного мозга.

А значительное их снижение может быть признаком гематологических заболеваний крови, вплоть до лейкозов. У молодых людей — признаками тромбоцитопенической пурпуры и других заболеваний крови. Так же может появляться на фоне приема противоопухолевых и цитостатических препаратов, гипофункции щитовидной железы.

Это основные защитники нашего организма, представители клеточного звена иммунитета. Повышение общего количества лейкоцитов чаще всего свидетельствует о наличии воспалительного процесса, преимущественно бактериальной природы. Также может оказаться признаком так называемого физиологического лейкоцитоза (под воздействием боли, холода, физической нагрузки, стресса, во время менструации, загара).

Нормы у мужчин и женщин обычно колеблются от 4,5 до 11,0*10*9/литр.

Снижение лейкоцитов – признак подавления иммунитета. Причиной чаще всего являются перенесенные вирусные инфекции, прием некоторых лекарств (в том числе нестероидных противовоспалительных и сульфаниламидов), похудение. Гораздо реже — иммунодефициты и лейкозы.

Самый большой пул лейкоцитов, составляющий от 50 до 75% всей лейкоцитарной популяции. Это основное звено клеточного иммунитета. Сами нейтрофилы делятся на палочкоядерные (юные формы) и сегментоядерные (зрелые). Повышение уровня нейтрофилов за счёт юных форм называют сдвигом лейкоцитарной формулы влево и характерно для острой бактериальной инфекции. Снижение — может быть признаком вирусной инфекции, а значительное снижение — признаком заболеваний крови.

Второй после нейтрофилов пул лейкоцитов. Принято считать, что во время острой бактериальной инфекции число лимфоцитов снижается, а при вирусной инфекции и после неё – повышается.

Значительное снижение лимфоцитов может наблюдаться при ВИЧ-инфекции, при лейкозах, иммунодефицитах. Но это случается крайне редко и как правило сопровождается выраженными симптомами.

Редкие представители лейкоцитов. Повышение их количества встречается при аллергических реакциях, в том числе лекарственной аллергии, также является характерным признаком глистной инвазии.

Самая малочисленная популяция лейкоцитов. Их повышение может говорить об аллергии, паразитарном заболевании, хронических инфекциях, воспалительных и онкологических заболеваниях. Иногда временное повышение базофилов не удается объяснить.

Самые крупные представители лейкоцитов. Это макрофаги, пожирающие бактерии. Повышение значений чаще всего говорит о наличии инфекции — бактериальной, вирусной, грибковой, протозойной. А также о периоде восстановления после них и о специфических инфекциях — сифилисе, туберкулезе. Кроме того может быть признаком системных заболеваниях — ревматоидный артрит и другие.

Если набрать кровь в пробирку и оставить на какое-то время — клетки крови начнут падать в осадок. Если через час взять линейку и замерить, сколько миллиметров эритроцитов выпало в осадок — получим скорость оседания эритроцитов.

В норме она составляет от 0 до 15 мм в час у мужчин, и от 0 до 20 мм у женщин.

Может повышаться, если эритроциты чем-то отягощены — например белками, которые активно участвуют в иммунном ответе: в случае воспаления, аллергической реакции, аутоимунных заболеваний — ревматоидный артрит, системная красная волчанка и другие. Может повышаться при онкологических заболеваниях. Бывает и физиологическое повышение, объясняемое беременностью, менструацией или пожилым возрастом.

В любом случае — высокий СОЭ всегда требует дополнительного обследования. Хоть и является неспецифическим показателем и может одновременно говорить о многом, но мало о чем конкретно.

В любом случае по общему анализу крови практически невозможно поставить точный диагноз, поэтому этот анализ является лишь первым шагом в диагностике и некоторым маячком, чтобы понимать, куда идти дальше. Не пытайтесь найти в своем анализе признаки рака или ВИЧ — скорее всего их там нет. Но если вы заметили любые изменения в анализе крови — не откладывайте визит к врачу. Он оценит ваши симптомы, соберет анамнез и расскажет, что делать с этим анализом дальше.

Мы заметили, что в комментариях очень много вопросов по расшифровке анализов, на которые мы не успеваем отвечать. Кроме того, чтобы дать хорошие рекомендации — важно задать уточняющие вопросы, чтобы узнать ваши симптомы. У нас в сервисе очень хорошие терапевты, которые могут помочь с расшифровкой анализов и ответить на любые ваши вопросы. Для консультации переходите по ссылке.

источник

Одним из методов клинической диагностики является исследование крови способом иммунофенотипирования лимфоцитов. В его основе – реакция между антителами и антигенами, которая используется для определения типов клеток крови, взятых из образцов биологического материала – крови, лимфатических узлов или костного мозга.

Анализ проводится с использованием специальных маркеров или меток, которые присоединяются к антигенам клеток. С помощью лабораторного оборудования отслеживают маркеры, производят подсчет клеток крови. Знание количества каждой из них позволяет квалифицировать опухолевые заболевания, подтвердить диагноз пациенту с определением конкретного его типа, например: достоверно установить вид лимфомы, лейкоза. Такая точная диагностика позволяет сделать выбор наиболее эффективной схемы лечения.

Иммунофенотипирование – это исследование лимфоцитов, которое помогает увидеть клетки крови, распознать их принадлежность к определенному виду. Исследование проводят с использованием современного диагностического оборудования – цитофлюориметров или особых микроскопов, способных опознавать люминесцирующие составляющие, которые помогают различать разновидности люминесцирующих кровяных телец, вести точный их подсчет в каждой пробе. Оборудование позволяет опознать каждую из меток. Маркирование клеток – это добавление в пробу антикоагулянта (реагент К2ЭДТА).

Забор образца для анализа производится из вены в области локтевого сустава. Для точного результата пациент должен соблюсти условия – проба берется натощак в утреннее время. В некоторых случаях допускается легкий прием пищи за 4 часа до процедуры, пациенту можно выпить небольшое количество обычной воды. Занятия спортом накануне диагностики или прием алкоголя запрещен, нарушение запрета приводит к искаженным результатам анализа. Повышенная психоэмоциональная нагрузка недопустима.

Для взятия крови специалист использует вакуумную пробирку. Ее применение позволяет достичь точного результата исследования, снизить болевые ощущения, точно произвести соотношение биологического материала и реагента.

После того, как образец поместили в пробирку, лаборант перемещает взятую пробу с антикоагулянтом, для этого требуется 10 раз медленно перевернуть емкость.

Для хранения и транспортировки материала для анализа требуется соблюдение условий: температурного режима при хранении образца от 18 до 23°С, сохранения положения пробирки – вертикально. Срок ожидания результатов не превышает 24 часов от взятия пробы. Время проведения исследования – 4 часа.

Сбор биоматериала для анализа

В ходе проведения исследования специалисты клинической лаборатории отслеживают показатели в периферической крови пациента, возможные поражения. На бланк анализа заносят показатели:

  1. Абсолютное количество лимфоцитов, имеющих здоровое округлое ядро без патологий.
  2. Содержание Т-клеточных лимфоцитов – ядро этого вида кровяных телец образуется и созревает в тимусе или вилочковой железе. Обеспечивает иммунную реакцию организма в определенных условиях, осуществляет контроль над гуморальным ответом организма – работой В-лимфоцитов, которые образовывают антитела. Обозначают ядро Т-клеточного лимфоцита как CD3+.
  3. Количественное значение Т-хеплеров (ядро обозначается CD3+CD4+) – разновидности Т-лимфоцитов, оптимальное количество которых в крови способствуют усилению иммунного ответа организма на поражение чужеродным антигеном, их 2 типа. Т-клеточный хелпер первого типа является «защитником» от опухолевых новообразований, вирусных агентов, участвует в защитных воспалительных реакциях. Второй Т-клеточный тип обеспечивает взаимосвязь с гуморальным иммунитетом, участвует в выработке иммуноглобулина Е – веществе, воздействующим на агрессивные аллергены внешней среды, смягчает поражение ими.
  4. Количество Т-цитотоксических лимфоцитов, ядро которых принято обозначать как CD3+CD8+. Такие лимфоциты распознают поражение клеток собственного организма и проводят их лизис или растворение. Таким способом организм борется с опухолевыми тканями, с поражением бактериями, которые паразитируют на клеточном уровне. Ядро Т-цитотоксического лимфоцита – важный компонент иммунитета, направленного на уничтожение вирусов.
  5. В-лимфоциты, обозначаемые символами СD19+, вырабатывают активные вещества (антитела), действие которых направлено на поддержание гуморального иммунитета.
  6. Количество ЕК-клеток, их ядро обозначается как CD3-CD16+CD56+. Их называют естественными, или натуральными, киллерами. Такое название определяет их неиммунная цитологическая активность, которая направлена на клетки-мишени, имеющие неопластические изменения.
  7. Т-ЕК (ЕКТ) – клетки, ядро которых имеет естественную киллерную активность, защищают от поражения клеток, имеющих качества и признаки Т-лимфоцитов.
  8. Иммунорегуляторный индекс, который показывает соотношение Т-хелперов и Т-цитотоксических клеток в крови, обозначается в анализе в виде соотношения CD3+CD4+/CD3+CD8+.

Фенотипирование видов лимфоцитов назначают для диагностики ряда заболеваний. Иммунологи назначают исследование, если имеются основания заподозрить одни из них или при наличии «ярких» признаков других. Например: расшифровка количества лимфоцитов с определенным фенотипом понадобится при:

  • инфекционных заболеваниях, поражении хронического характера или если болезнь имеет затяжной характер;
  • аллергических реакциях организма;
  • проявлении устойчивых признаков и симптомов, указывающих на иммунодефицит врожденного или приобретенного свойства;
  • подозрении на опухолевые образования доброкачественной или злокачественной природы;
  • заболеваниях аутоиммунного типа, спровоцированных расстройством защитной системы, поражением собственного организма;

Диагностика периферической крови требуется в других случаях. Ее назначат перед серьезным оперативным вмешательством, которое требуется больному в плановом порядке. При иммунофенотипировании врач узнает все процессы иммунного характера, происходящие у конкретного больного, что позволяет скорректировать защитные процессы, избежать клеточного поражения, и нормализовать их работу. Большое значение для врача имеют показатели различных видов кровяных телец, Т-клеточный состав крови в послеоперационный период, особенно в случаях с развитием патологических процессов.

Метод применяют и для оценки состояния человека, которому требуется трансплантация органов или проведена операция – анализ на иммунофенотипирование проведут на подготовительном этапе и во время послеоперационного восстановления, чтобы предупредить поражение и отторжение органа. Направление на анализ получают пациенты, лимфоциты которых могут изменить качественный и количественный состав из-за лечения заболеваний медикаментами определенных групп – иммуномодуляторами, иммунодепрессантами или цитостатиками.

Нормы и референсные значения содержания в крови частиц определенного вида зависят от возраста пациента. Врачи для оценки показателей используют специальные таблицы, в которых указаны оптимальные значения, пределы отклонений.

Результат анализа покажет отклонение от нормы по количеству Т-клеточных лимфоцитов. Повышение их количества свидетельствует об иммунном воспалении, поражении или гиперактивности защитных процессов пациента. Такое превышение нормы вызывают заболевания – лимфолейкоз (острая и хроническая стадии), ряд вирусных и бактериальных инфекций в начале развития болезни. Увеличение Т-лимфоцитов возможно при изменении характера заболевания, переход его в хроническую форму.

Если у обследуемого абсолютное число Т-клеточных лимфоцитов снижено, говорят о развитии иммунологического паралича. Он сопровождает воспалительный процессы, может указывать на развитие злокачественных опухолевых новообразований. Такой показатель выявляется, если больная сердечная мышца – миокард, при некоторых сложных травмах, его снижение вызывает курение.

Увеличение числа В-лимфоцитов сигнализирует о поражении организма воспалительным процессом, развивающимся в острой или хронической стадии. Его природа – аллергического, аутоиммунного или инфекционного характера. Эти лимфоциты увеличиваются из-за В-лимфолейкоза, бронхиальной астмы, муковисцидоза, больной печени и при хронических патологиях. Увеличенные показатели по В-лимфоцитам в анализе отражают восстановление после инфекций, перенесенных в острой и тяжелой форме.

Если число В-лимфоцитов не соответствует нижним пределам нормы, при проведении дополнительной диагностики врач подтвердит пациенту развитие опухолевых новообразований, острые вирусные инфекции или инфекции бактериального типа, развитие очагов воспаления в организме больного.

Повышенному уровню естественных киллеров способствуют патологические процессы, связанные с:

  • запуском онкологических процессов;
  • тяжелым течением воспалительного процесса, воспалительные заболевания в хронической стадии;
  • с избыточной выработкой антигенов, борющихся с бактериальным или вирусным процессом.

Содержание в клетках крови естественных киллеров может быть снижено из-за повышения уровня в крови Т-лимфоцитов и связано с процессами, вызывающими такое повышение.

Если значение показателя CD8+ – в превышающих норму цифрах, закономерно заподозрить опухолевое заболевание, вирусный процесс в активной стадии (при развитии вирусной, грибковой или внутриклеточной инфекции, заболеваний подобного типа).

Читайте также:  Абсолютные показатели лимфоцитов крови

Сниженные значения Т-цитотоксических лимфоцитов в результатах анализа предупреждают о процессах, развивающихся на фоне аутоиммунных болезней. Такой процесс подтверждает атаку аллергенов, развитие аллергии на момент обследования.

Как действует ядро зрелого Т-цитотоксического лимфоцита

Повышение содержание Т-хеплеров свидетельствует об остром воспалительном процессе в активной стадии. Иммунное воспаление отражает увеличение Т-хеплеров первого типа, рост показателя по второму типу определяет наличие воспалительного процесса аллергической природы. Обострение аутоиммунной патологии определяется, если Т-хеплеры обоих типов увеличены.

Снижение Т-хелперов происходит из-за состояния иммунологического паралича, выявляет иммунодефицит вторичного типа у больного.

Количество Т-ЕК клеток повышается, увеличиваясь по отношению к референсным значениям их содержания в крови по причине:

  • наличия хронических воспалительных процессов с длительным периодом воздействия на иммунную систему;
  • воспалительных процессов, сопровождаемых тяжелым протеканием, осложнениями при лечении;
  • сохранение инфекции в активном состоянии в клетках организма на протяжении значительного периода времени.

Сниженные лимфоциты такого вида не отображают значимые процессы, не являются важными для диагностики.

Использование метода иммунофенотипирования лимфоцитов позволяет проводить диагностику патологий, заподозрить развитие опасных, опухолевых болезней. Метод является безопасным для обследуемого, не требует значительных финансовых затрат.

источник

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

Значительный прогресс в гематологических исследованиях связан в последние годы с использованием современных иммунологических методов и автоматизированных средств анализа и сортировки клеток периферической крови и костного мозга — проточных цитометров. Традиционные морфологические и цитохимические исследования клеток субстрата болезни (кровь, красный костный мозг, лимфатические узлы, селезёнка и т.д.) во многих случаях, особенно при лимфопролиферативных заболеваниях, не позволяют выявить всё многообразие вариантов среди морфологически сходных форм и установить источник происхождения патологического клона. Эти задачи могут быть решены только путём изучения иммунологической характеристики клеток. Каждой стадии дифференцировки гемопоэтических клеток соответствует свой набор антигенов, которые по международной классификации называются дифференцировочными и разделяются на кластеры дифференцировки, обозначаемые CD.

При неопластических изменениях блок дифференцировки может произойти на любой стадии нормального развития клеток, в результате чего образуется клон патологических клеток, определяющих субстрат болезни и имеющих одинаковую иммунологическую (или фенотипическую) характеристику. Проведя исследования этих маркёров на клетках, можно определить, какой форме и варианту заболевания они соответствуют, то есть на основе иммунологического фенотипа клеток проводить дифференциальную диагностику, которая наиболее трудна при лимфопролиферативных заболеваниях, потому что основной клеткой патологического субстрата болезни являются морфологически почти однотипные клетки.

Фенотипирование позволяет с помощью моноклональных антител типировать бластные и зрелые клетки крови миело-, моно-, лимфоцитарного ряда по наличию дифференцировочных антигенов (рецепторов) в клеточной стенке. В разделе «Оценка иммунного статуса организма» частично изложена характеристика и диагностическое значение исследования клеточных маркёров; ниже приведена краткая характеристика антигенных маркёров клеток применительно к диагностике гемобластозов. На мембранах клеток крови и красного костного мозга можно выявить следующие антигены (маркёры).

  • CD2 — мономерный трансмембранный гликопротеид. Он присутствует на поверхности всех циркулирующих в крови Т-лимфоцитов и на некоторых NK-лимфоцитах. CD2 принимает участие в процессе альтернативной активации Т-лимфоцитов. Выявление CD2 с помощью моноклональных антител в клинической практике используют для фенотипирования острых Т-клеточных лейкозов, лимфом, хронических воспалительных и иммунодефицитных состояний.
  • CD3 — белковый комплекс, ассоциированный с антиген-специфическим Т-клеточным рецептором, это основной функциональный маркёр Т-лимфоцитов. Он способствует передаче сигнала активации с мембраны в цитоплазму клетки. Определение CD3 показано для диагностики острых Т-клеточных лейкозов, лимфом (CD3 не экспрессируется при не-Т-клеточных лимфоидных новообразованиях) и иммунодефицитных заболеваний.
  • CD4 — трансмембранный гликопротеид, экспрессируемый субпопуляцией Т-хелперов (индукторов), составляющих 45% лимфоцитов периферической крови. На ранних стадиях развития лимфоцитов в тимусе, антигены CD4, так же как CD8, экспрессируется всеми кортикальными лимфоцитами. Медуллярные тимоциты, фенотип которых схож со зрелыми CD4+Т-клетками периферической крови (Т-хелперы), экспрессируют уже либо CD4, либо CD8 рецепторы. В периферической крови до 5% клеток несут одновременно маркёры CD4 и CD8. Незначительная экспрессия CD4 возможна на некоторых клетках моноцитарного ряда. CD4 экспрессируется в большинстве случаев Т-клеточных лимфом, включая грибовидный микоз, а также при HTLV-ассоциированном Т-клеточном лейкозе (HTLV — human T-lymphotropic virus — Т-лимфотропный вирус человека).
  • CD5 — одноцепочечный гликопротеид, присутствующий на всех зрелых Т-лимфоцитах и большинстве тимоцитов, слабо экспрессируется В-лимфоцитами. CD5 выявляют на неопластических клетках В-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза и центроцитарной лимфомы. При других типах злокачественных лимфоидных заболеваний — фолликулярной лимфоме, волосатоклеточном лейкозе, крупноклеточной лимфоме — CD5 не экспрессируется.
  • CD7 — одноцепочечный белок, самый ранний маркёр Т-клеточной дифференцировки. Он экспрессируется про-Т-лимфоцитами ещё до миграции их в тимус. CD7 выявляют на большинстве NK-клеток, слабая экспрессия отмечена на моноцитах. В-лимфоциты и гранулоциты не содержат этого антигена. Определение CD7 применяют в целях диагностики лимфом, детских Т-клеточных лимфобластных лейкозов.
  • CD8 — белок, состоящий из двух полипептидных цепей, связанных дисульфидными мостиками. Он экспрессируется субпопуляцией цитотоксических и супрессорных Т-лимфоцитов, которые составляют 20-35% лимфоцитов периферической крови. Этот антиген имеют также NK-лимфоциты, кортикальные тимоциты, 30% медуллярных тимоцитов и субпопуляции клеток красного костного мозга. CD8 исследуют для количественной оценки содержания Т-супрессоров (см. выше раздел «Т-лимфоциты-супрессоры в крови»).
  • CD10 — ассоциированная с клеточной мембраной эндопептидаза. CD10 экспрессируют молодые формы В-лимфоцитов и субпопуляция кортикальных лимфоцитов. CD10 экспрессируют все клетки ОЛЛ.
  • CD11с экспрессируют на клеточной мембране макрофаги, моноциты, гранулоциты, NK-клетки и клетки волосатоклеточного лейкоза.
  • CD13 — гликопротеид, экспрессируемый клетками миеломоноцитарного ряда (клетки-предшественники, нейтрофилы, базофилы, эозинофилы, моноциты и клетки миелоидных лейкозов). Он отсутствует на Т и В-лимфоцитах, эритроцитах и тромбоцитах.
  • CD14 — поверхностный мембранный гликопротеид. Его экспрессируют в основном моноциты и макрофаги. CD14 определяют более чем на 95% моноцитах периферической крови и костного мозга. Сильную экспрессию CD14 наблюдают при острых миелобластных лейкозах. При острых и хронических лимфобластных лейкозах этот антиген не экспрессируется.
  • CD15 представляет собой олигосахарид. Он принимает участие в процессах фагоцитоза и хемотаксиса. Этот антиген присутствует на поверхности зрелых гранулоцитов и клетках Березовского-Штернберга. Экспрессию антигена CD15 выявляют при болезни Ходжкина. При неходжкинских лимфомах CD15 в большинстве случаев не обнаруживают.
  • CD16 экспрессируется на поверхности гранулоцитов, моноцитов, макрофагов и NK-клеток. Все лимфоциты, экспрессирующие этот антиген, обладают способностью к антителозависимой клеточной цитотоксичности. CD16 определяют при типировании хронических миелоцитарных лейкозов, для характеристики NK-клеток.
  • CD19 — гликопротеин, присутствующий на всех периферических В-лимфоцитах, а также на всех предшественниках В-клеток. Он отсутствует на плазматических клетках. Это самый ранний маркёр В-клеток, играет важную роль в регуляции активации и пролиферации В-лимфоцитов. CD19 экспрессируется на всех неопластических клетках острых лейкозов В-клеточного происхождения, а также присутствует при некоторых формах острых монобластных лейкозов.
  • CD20 — негликозилированный белок. В онтогенезе В-лимфоцитов антиген CD20 появляется после CD19 на стадии пре-В-клеточной дифференцировки лимфоцитов. На плазматической мембране плазматических клеток он отсутствует. Экспрессируется при ОЛЛ, В-клеточных хронических лимфоцитарных лейкозах, волосатоклеточных лейкозах, лимфомах Беркитта и очень редко — при острых монобластных лейкозах.
  • CD21 — гликопротеид, в значительном количестве присутствует на В-лимфоцитах в лимфоидных органах и в небольшом количестве — на В-клетках периферической крови. CD21 — рецептор для вируса Эпстайна-Барр.
  • CD22 — белок, состоящий из двух полипептидных цепей. Экспрессируется на мембране большинства В-лимфоцитов, включая клетки-предшественники (пролимфоциты). Антиген не экспрессируется на В-лимфоцитах (плазматические клетки) после их активации. Наиболее выраженную экспрессию CD22 выявляют на клетках при волосатоклеточном лейкозе, слабую — при миелоидных лейкозах и не-Т-клеточных ОЛЛ.
  • CD23 — гликопротеид, экспрессируемый активированными В-лимфоцитами периферической крови в гораздо большей степени. CD23 опосредует IgE-зависимую цитотоксичность и фагоцитоз макрофагами и эозинофилами.
  • CD25 — одноцепочечный гликопротеид, идентифицированный как низкоаффинный рецептор к ИЛ-2. Этот рецептор экспрессируется на активированных Т-лимфоцитах и, с меньшей плотностью, на активированных В-клетках. В периферической крови здоровых людей антиген присутствует более чем на 5% лимфоидных клеток.
  • CD29 — рецептор фибронектина. Широко распространён в тканях, экспрессируется лейкоцитами. Определение CD29 на клетках периферической крови используют для типирования субпопуляции Т-клеток, имеющих фенотип CD4+CD29+, которые называют хелперами 2 типа (Th2). Эти клетки посредством продукции лимфокинов участвуют в реализации гуморального иммунного ответа.
  • CD33 — трансмембранный гликопротеид. Присутствует на поверхности клеток миелоидного и моноцитарного рядов. Его обнаруживают на поверхности моноцитов и, в меньшей степени, гранулоцитов периферической крови. Приблизительно 30% клеток красного костного мозга экспрессируют CD33, включая миелобласты, промиелоциты и миелоциты. Антиген отсутствует на мембранах полипотентных стволовых клеток. Определение CD33 используют для характеристики клеток при лейкозах миелоидного происхождения. Клетки лейкозов лимфоидного и эритроидного происхождения не экспрессируют CD33.
  • CD34 — фосфогликопротеин, экспрессируется гемопоэтическими клетками-предшественниками, включая монопотентные стволовые клетки. Наиболее выраженную экспрессию Аг наблюдают у ранних предшественников; при созревании клеток экспрессия маркёра падает. CD34 обнаружен также на эндотелиальных клетках. Определение CD34 используют для характеристики клеток при острых миело- и лимфобластных лейкозах. При хронических лимфоцитарных лейкозах и лимфомах экспрессии антигена CD34 не выявляют.
  • CD41а экспрессируется тромбоцитами и мегакариоцитами. Моноклональные антитела для выявления CD41а используют для диагностики мегакариобластного лейкоза. При тромбастении Глянцманна экспрессия этого антигена отсутствует или значительно подавлена.
  • CD42b — мембранный гликопротеид, состоящий из двух полипептидных цепей. Маркёр выявляют на поверхности тромбоцитов и мегакариоцитов. В клинической практике обнаружение CD42b используют для диагностики тромбоцитопатии — синдрома Бернара-Сулье.
  • CD45RA принадлежит к классу трансмембранных гликопротеинов. Это общий лейкоцитарный антиген. Экспрессируется на клеточной мембране В-лимфоцитов, в меньшей степени Т-лимфоцитов и на зрелых медуллярных тимоцитах. Маркёр не экспрессируется гранулоцитами.
  • CD45RО — низкомолекулярная изоформа CD45RA — общего лейкоцитарного Аг. Выявляют на Т-клетках (Т-лимфоциты памяти), субпопуляции В-лимфоцитов, моноцитах и макрофагах. Моноклональные АТ к CD45RО взаимодействуют с большинством тимоцитов, субпопуляцией покоящихся CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов и зрелыми активированными Т-клетками. Клетки миеломоноцитарного происхождения, гранулоциты и моноциты также несут этот антиген. Его выявляют при центробластных и иммунобластных лимфомах.
  • CD46 — О-гликозилированный димер. Он широко распространён в тканях и экспрессируется Т- и В-лимфоцитами, моноцитами, гранулоцитами NK-клетками, тромбоцитами, эндотелиальными клетками, фибробластами, но отсутствует на поверхности эритроцитов. CD46 обеспечивает защиту тканей от действия комплемента.
  • CD61 — тромбоцитарный антиген. Экспрессируется на тромбоцитах периферической крови и красного костного мозга, а также на мегакариоцитах и мегакариобластах. Его определение используют в качестве маркёра при острых мегакариобластных лейкозах. Экспрессия антигена отсутствует или подавлена у больных с тромбастенией Глянцманна.
  • CD95, называемый также Fas или APO-1, — трансмембранный гликопротеин, член семейства рецепторов фактора некроза опухолей. Он экспрессируется в значительных количествах на Т-лимфоцитах (CD4+ и CD8+) периферической крови и, в меньшей степени, на В-лимфоцитах и NК-клетках. Этот антиген экспрессируется также на гранулоцитах, моноцитах, клетках тканей и неопластических клетках. Связывание CD95 с Fas-лигандом (CD95L), индуцирует в клетках апоптоз.
  • CD95L, или Fas-лиганд, мембранный белок, относящийся к семейству рецепторов фактора некроза опухолей. Этот антиген экспрессируется цитотоксическими Т-лимфоцитами, NК-клетками и очень часто опухолевыми клетками; основной индуктор апоптоза в клетках.
  • HLA-DR — мономорфная детерминанта молекул II класса главного комплекса гистосовместимости человека (HLA). Маркёр экспрессируется на клетках Лангерганса, дендритных клетках лимфоидных органов, определённых типах макрофагов, В-лимфоцитах, активированных Т-клетках и эпителиальных клетках тимуса. Исследование на данный маркёр используют для количественного определения активированных Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+ HLA-DR+.

Используя различный подбор моноклональных антител к маркёрам, можно составить фенотипический портрет клеток, характерных для данной формы лейкоза.

Помимо использования методов иммунофенотипирования для диагностики и дифференциальной диагностики гемобластозов, особенно важным оказалось их применение в процессе лечения для оценки состояния ремиссии и остаточной популяции лейкозных клеток. Зная фенотипический «портрет» бластных клеток в период установления диагноза, по этим маркёрам удаётся обнаружить клетки лейкозного клона в период ремиссии, а по нарастанию их количества — предсказать развитие рецидива задолго (за 1-4 мес) до появления его клинико-морфологических признаков.

источник